贊皇大棗黑腐病菌拮抗菌條件如何優(yōu)化

　　以贊皇大棗(Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao’)黑腐病主要病原菌莖點(diǎn)霉菌(Phoma sp.)為靶標(biāo)，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌(Bacillus spp.)菌株進(jìn)行室內(nèi)多重篩選，并通過單因素試驗(yàn)對篩選獲得的目標(biāo)菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標(biāo)菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果;其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖.

　　贊皇大棗(Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao’)又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實(shí)病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴(yán)重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達(dá)50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產(chǎn)量、果實(shí)品質(zhì)和商品價值。

　　贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實(shí)病害的農(nóng)藥使用具有較高的要求。生物農(nóng)藥相對于化學(xué)農(nóng)藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點(diǎn)，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產(chǎn)物已成功應(yīng)用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經(jīng)濟(jì)和社會效益[4]�？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis)GBO3(美國)、A213(澳大利亞)、RB-14(日本)、B916(中國)、B908(中國)等具有優(yōu)良性狀的菌株已經(jīng)應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐[5];蠟質(zhì)芽孢桿菌(Bacillus cereus)菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium)具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強(qiáng)的適應(yīng)力和耐受性。目前有關(guān)棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農(nóng)用鏈霉素(70～140 IU/mL)、DT(50%， 600倍稀釋液)、卡那霉素(140 IU/mL)和土霉素(210 IU/mL)等在棗黑腐病發(fā)病期內(nèi)混合使用，保果率在90% 以上;李志清等[8]將3%中生菌素(800倍稀釋液)、4%農(nóng)抗120(400倍稀釋液)和4%雙抗(400倍稀釋液)等與化學(xué)農(nóng)藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌(Bacillus spp.)開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實(shí)病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點(diǎn)霉菌(Phoma sp.)為靶標(biāo)，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進(jìn)行了室內(nèi)多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗(yàn)，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 靶標(biāo)菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點(diǎn)霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學(xué)應(yīng)用化學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)室分離鑒定。

　　1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

　　1.2.1 病原菌培養(yǎng)

　　芽孢桿菌屬細(xì)菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強(qiáng)的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點(diǎn)[13]而備受關(guān)注。一些芽孢桿菌菌株已經(jīng)開發(fā)成生物農(nóng)藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內(nèi)篩選中表現(xiàn)出了良好的抑菌效果，具有作為生物農(nóng)藥的潛力，但還需對其田間效果作進(jìn)一步試驗(yàn)研究。此外，還需對該菌株進(jìn)行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質(zhì)測定、劑型研制、安全性試驗(yàn)等方面的研究工作，為開發(fā)具有實(shí)際應(yīng)用價值的生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1] 及 華，關(guān)軍鋒，竇世娟，等.采后贊皇大棗不同包裝處理的生理生化性狀差異[J].果樹學(xué)報，2004，21(6)：540-543.

　　[2] 趙叢枝. 贊皇大棗采后生理及其貯藏技術(shù)研究[D].河北保定： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

　　[3] 李志清，常聚普，程國華，等.棗黑腐病防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，2000(12)：10-12.

　　[4] 張麗萍，張貴云.微生物農(nóng)藥研究進(jìn)展[J].北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000(4)：22-24.

　　[5] 李 明，雙 寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，40(9)：111-114.

　　[6] 高 芬，馬利平，喬雄梧，等.蠟質(zhì)芽孢桿菌BC98-I發(fā)酵液與粗提物對黃瓜枯萎病菌的抑菌特性研究[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報， 2006，14(1)：189-192.

　　[7] 陳貽金，陳謨林，朱林元.棗縮果病及其防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，1989(8)：3-7.

　　[8] 李志清，張兆欣，田國忠，等.棗黑腐病田間藥劑防治技術(shù)研究[J].中國森林病蟲，2005(5)：3-6.

　　[9] 沈 萍，范秀容，李廣武.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：高等教育出版社，2001.

　　[10] 林福呈，李德葆.枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)S9對植物病原真菌的溶菌作用[J].植物病理學(xué)報，2003，33(2)：174-177.

　　[11] 董金甫，李瑤卿.茶多酚抑菌作用的研究[J].茶葉，1992(3)：46-49.

　　閱讀期刊：中國南方果樹

　　《中國南方果樹》(雙月刊)曾用刊名：(中國柑桔)1972年創(chuàng)刊，堅(jiān)持理論與提高并重，側(cè)重普及的辦刊宗旨。我國南方和西部惟一的全國性技術(shù)類果樹期刊，直接從生產(chǎn)、科研、教學(xué)人員的自由來稿中，擇優(yōu)編發(fā)那些根據(jù)實(shí)踐得到的第一手資料撰寫的高新技術(shù)、應(yīng)用技術(shù)原始文獻(xiàn)。注重技術(shù)的創(chuàng)新性、先進(jìn)性、實(shí)用性以及對生產(chǎn)的指導(dǎo)性和報道的時效性。